Die Porträtgalerie umfasst mehr als 200 Bildnisse, u.a. Gemälde von Lukas Cranach, Tizian, Anton van Dyck und Diego Velázquez. Die meisten Habsburger und zahlreiche andere Herrscher sind mit Porträts vertreten - u.a. Kaiser Maximilian I., Kaiser Karl V., König Philipp II. von Spanien, die junge Maria Theresia und Sultan Süleiman der Prächtige. Eine Besonderheit sind die zahlreichen Kinderporträts wie etwa das Rubens zugeschriebene Bildnis der dreijährigen Eleonora Gonzaga.

Keine andere Familie hat die Geschichte Europas über die Jahrhunderte so sehr geprägt wie die Habsburger. Vom 15. bis ins frühe 20. Jahrhundert stellten sie viele Kaiser und Könige und waren mit fast allen bedeutenden europäischen Dynastien verwandt oder verschwägert. Die Porträtgalerie bietet nicht nur einen Rundgang durch die Geschichte eines europäischen Herrscherhauses, sondern verschafft zugleich einen einzigartigen Überblick über die höfische Porträtmalerei von der Spätgotik bis zum Klassizismus.

Die Porträtgalerie befindet sich im Hochschloss, wo zur Zeit Ferdinands II. die Wohnräume lagen.